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ibidi應(yīng)用指南|免疫熒光實(shí)驗(yàn)-雷萌生物

date:2022-12-15 14:31:42

  免疫熒光實(shí)驗(yàn)原理

  

  免疫熒光(IF)是使用顯微鏡深入了解細(xì)胞結(jié)構(gòu)和過程的有效方法。此方法可評估特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和位置,使得免疫熒光成為科學(xué)家解決許多細(xì)胞生物學(xué)問題不可或缺的工具。

  

  免疫熒光實(shí)驗(yàn)基于以下主要步驟:

  

  1.特異性抗體與感興趣的蛋白質(zhì)結(jié)合。

  

  2.熒光染料與這些免疫復(fù)合物偶聯(lián),以便使用顯微鏡觀察感興趣的蛋白質(zhì)。

  

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  內(nèi)皮細(xì)胞中vWF的免疫熒光染色。肌動蛋白用phalloidin染色(綠色),細(xì)胞核用DAPI染色(藍(lán)色)。

  

  區(qū)分直接和間接免疫熒光。在直接免疫熒光中,一抗直接偶聯(lián)到熒光團(tuán)(也稱為熒光色素),便于處理和快速可視化。在間接免疫熒光中,使用特異性結(jié)合一抗的二級熒光團(tuán)偶聯(lián)抗體來可視化感興趣的結(jié)。

  

  盡管di二種方法比直接免疫熒光更耗時,但它有幾個顯著的優(yōu)勢,比如它通常更便宜,因?yàn)槎箍梢杂糜诓煌囊豢埂4送猓ㄟ^結(jié)合多個一抗和特定的二抗(每個抗體都用不同的熒光團(tuán)標(biāo)記),可以在單個樣品中平行特異地顯示多個蛋白質(zhì)(多色免疫熒光)。

  

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  免疫熒光染色:典型的工作流程

  

  每個免疫熒光染色方案由培養(yǎng)、固定、染色、成像四個主要步驟組成,可細(xì)分如下:

  

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  免疫熒光染色是一種非常敏感的方法,可能需要排除故障免疫英冠染色故障排除指南。方案中的微小變化可能會導(dǎo)致不同的結(jié)果,而這些結(jié)果不再具有可比性。因此,在您的特定方案中精確地保持完全相同的條件是非常重要的(例如,細(xì)胞密度、抗體稀釋度、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間)。

  

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  免疫熒光實(shí)驗(yàn)方案對比

  

  傳統(tǒng)染色與ibidi方案染色

  

  當(dāng)使用任何ibidi解決方案時,ibidi的免疫熒光染色方案比傳統(tǒng)方案要簡便快速的多。無需在松散的蓋玻片上生長細(xì)胞,細(xì)胞可直接在ibidi玻片上生長和染色。

  

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  用于免疫熒光應(yīng)用的各種ibidi產(chǎn)品

  

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  更多ibidi相關(guān)產(chǎn)品的免疫熒光實(shí)驗(yàn)應(yīng)用可查閱我們雷萌公眾號相關(guān)文章!

  

  參考文獻(xiàn)

  

  K.G. Zyner, A. Simeone, S.M. Flynn, et al. G-quadruplex DNA structures in human stem cells and differentiation. Nat Commun, 2022, 10.1038/s41467-021-27719-1

  

  C. Xu, et al. NPTX2 promotes colorectal cancer growth and liver metastasis by the activation of the canonical Wnt/beta-catenin pathway via FZD6. Cell Death & Disease, 2019, 10.1038/s41419-019-1467-7

  

  Kobayashi, T., et al. Principles of early human development and germ cell program from conserved model systems. Nature, 2017, 10.1038/nature22812

  

  H. Tada et al. Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells. PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

  

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