date:2022-10-26 15:23:05
1.介紹
ibidi泵系統/流體剪切力系統是專為灌注條件下的長期細胞調節而設計。標準方法是將一個載玻片連接到一個灌注裝置。在某些情況下，增加載玻片（細胞）的數量可能是有用的。例如，當計劃進行各種染色時，或者如果細胞數量對于后續的應用（如FACS）不夠時。
本應用是一個循序漸進依次連接µ-Slide VI0.4六通道載玻片的實驗方案。
重要提示！
串聯的通道承受著幾乎相同的流速，因此剪切應力也幾乎相同。
我們強力建議串聯通道載玻片，而不是并聯！
我們建議按所述方式連接不要超過兩個µ-Slide VI0.4 六通道載玻片
2.材料
對于設置，需要以下材料(無菌):
* 串聯連接管(ibidi #10830)，5 pieces
* 細胞培養基
* 接種了細胞的ibidi µ-Slide VI 0.4
* 灌流管
* 1 ml注射器
* 軟管夾
* 移液吸頭
重要提示！
將串聯連接管、細胞培養基、通道載玻片和灌注裝置在培養箱中平衡一整晚!
本方案的所有步驟都應在無菌條件下完成!
3.準備工作
整個設置相當于只有一個通道的標準實驗。 唯一的區別是，在將整個組件連接到Perfusion Set之前，先將多個通道串行連接起來。
3.1.接種細胞
像往常一樣在µ-Slide VI 0.4的通道中接種細胞。如果需要進一步的靜態培養，讓細胞附著并在附著后用60µl無細胞培養基填充儲液池。詳細說明見“使用ibidi流體剪切力系統培養內皮細胞實驗方法匯總”。細胞貼壁后，就可以進行載玻片的串連了。
3.2.泵設置
按照“使用ibidi流體剪切力系統培養內皮細胞實驗方法匯總”中的說明準備泵的設置。向灌流管的儲液池中各注入5ml平衡介質，并以中壓(約50mbar)運行泵，去除氣泡。
重要提示！
將公魯爾接頭連接到母魯爾接頭時，務必小心不要帶進氣泡。
盡可能快地工作，以避免載玻片和細胞冷凝。整個過程必須在10分鐘內完成。
4.串聯連接
通道的串聯連接是在細胞貼壁后和將載玻片連接到灌注管之前完成。
按照第3部分的描述準備載玻片，接種細胞并貼壁 如圖所示，將五個串行連接管連接到Luer端口
用無細胞培養基填充注液孔，直到所有注液孔完全充滿 在此步驟中，注意注液孔底部不能有氣泡
注意不能在注液孔中留有氣泡
用1ml的無菌注射器吸滿培養基，小心插入如圖的孔中，不要引入氣泡。
小心慢慢注入培養基，直到第一個串聯管有培養基微微冒出
小心的將串聯管彎過來，插入相鄰的Luer端口中。不要產生氣泡。
繼續推動注射器，直到第二根串聯管也被充滿，繼續推動注射器充滿下一根串聯管。
重復上面的操作，繼續充滿所有的通道和串聯管。
將所有的串聯管連接好后，將加滿液體排除氣泡的灌流管用軟管夾夾住。
從灌流管的母魯爾鎖定耦合器中拔出公魯爾接頭，并將其插入載玻片上末尾一個Luer端口中。在慢慢抽出注射器，用新鮮的培養基填滿Luer端口并去除氣泡
從灌流管的母魯爾鎖定耦合器中拔出第二個公魯爾接頭，并將其插入載玻片上另一端末尾的Luer端口
設置完成，可開始啟動實驗。別忘了取下軟管夾！
串聯灌流系統搭建完成。
5.調整流速
軟件中無法預見多個通道載玻片的設置。需要調整泵的參數以適應新的要求。作為指南您可以在軟件中選定正在使用是µ-Slide VI0.4通道載玻片。由此產生的流速(以及剪切應力)將低于在單通道的應用中。用所需的剪切應力啟動一個循環，手動測量流速(ibidi Pump Instructions, page 40（可聯系我們索要電子版文檔）)。然后進入重新校準對話框，輸入計算的（軟件給定的流速）和測量的流速。
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